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多肽的二維色譜分離研究.doc

  
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多肽的二維色譜分離研究,separation of peptides by two-dimensional chromatographic 1.2萬字32頁原創(chuàng)作品,已通過查重系統(tǒng) 摘 要目的: 以二維液相色譜為核心手段,結合其他分離技術,建立蛋白水解物為代表的多組分體系的分離方法,實現對多元組分的分離。從而進一步分析多...
編號:99-1434595大小:3.48M
分類: 論文>生物/化學論文

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多肽的二維色譜分離研究
Separation of peptides by two-dimensional chromatographic

1.2萬字 32頁 原創(chuàng)作品,已通過查重系統(tǒng)


摘 要
目的: 以二維液相色譜為核心手段,結合其他分離技術,建立蛋白水解物為代表的多組分體系的分離方法,實現對多元組分的分離。從而進一步分析多元組分中各組分的活性,為工業(yè)化生產活性多肽時建立產品品質控制體系積累一定的基礎數據,最終建立工業(yè)化多肽生產過程的質量評價體系。
方法: 一維下,通過對乙腈和水的比例,流動相中三氟乙酸比例,以及流速的篩選確定色譜柱條件為KromasilC18 柱(4.6 mm×150 mm5μm);流動相為乙腈-水(80∶20);流速為0.6mL/min,柱溫為25 ℃;檢測波長為228 nm;進樣量10μL;通過十通閥門的切換來實現二維。經篩選分子量10K部分切換時間為4min5min6min7min9min,10min。二維下,色譜條件為右泵色譜柱為KromasilC18 柱(4.6 mm×150 mm5μm),左泵色譜柱為凝膠柱;右泵流動相為乙腈-水(各含0.1%的三氟乙酸),左泵流動相為0.02%的曡氮鈉溶液 ,;右泵流速為0.3mL/min,左泵流速為0.6mL/min,柱溫為25 ℃;檢測波長為228 nm;進樣量10μL;
結果:通過二維液相后,分子量小于3K的組分峰數量由4個變成8個,平均峰面積102.064mAUR26;min變成754.335mAUR26;min,時間跨度由0.955min變成3.5min。分子量小于5K的組分峰數量由5個變成6-7個,平均峰面積139.877mAUR26;min變成2362.554mAUR26;min,時間跨度由1.165min變成4.927min。分子量大于10K的組分峰數量由2個變成7-8個,平均峰面積23.0365mAUR26;min變成2164.508mAUmR26;in,時間跨度由1.047min變成4.186min。可見在峰數量,均峰面積和均峰時間跨度上,3種樣品均有增加。
討論:該方法可用于玉米多肽分子量10K等多組分的分離


關鍵詞:高效液相色譜;二維;蛋白含量測定;超聲;純化