11頁8000余字
摘 要………………………………………………………………………………………2
前 言………………………………………………………………………………………2
一、材料、試劑和儀器 ………………………………………………………………3
1、 材料………………………………………………………………3
2、試劑………………………………………………………………3
3、儀器………………………………………………………………4
二、操作方法………………………………………………………………4
1、 葉綠體的制備 ………………………………………………………………4
1.1 葉綠體的分離提取…………………………………………………4
1.2 提純………………………………………………………………4
1.2.1 制備蔗糖梯度……………………………………………………4
1.2.2 葉綠體的純化……………………………………………………4
1.3 鏡檢……………………………………………………………4
2、葉綠體DNA的提取……………………………………………………………5
2.1 DNA的提取………………………………………………………………5
2.2 沉淀DNA………………………………………………………………5
3、所得DNA檢驗分析……………………………………………………………5
3.1 核酸濃度測定…………………………………………………………5
3.2瓊脂糖凝膠電泳…………………………………………………………5
三、結(jié)果…………………………………………………………6
1、 圖片………………………………………………………………6
2、 外分光光度檢測結(jié)果……………………………………………………7
四、討論和分析………………………………………………………………7
參考文獻(xiàn)……………………………………………………………9






[摘 要] 采用菠菜綠葉為材料，通過差速離心分離、密度梯度離心分離純化出葉綠體。顯微鏡下觀察所得葉綠體純度、形態(tài)及結(jié)構(gòu)，得到橢圓、球形的葉綠體。樣品用SDS、蛋白酶K、核酸酶處理后，用苯酚/氯仿及氯仿/異戊醇抽提處理提取。純化提出的ctDNA用紫外分光光度計檢測提取濃度，1%瓊脂糖電泳得到清晰而整齊的條帶。

[關(guān)鍵詞] 葉綠體 差速離心 密度梯度離心 ctDNA
Distill the DNA of the Plant Subcellular Chloroplast
Abstract： Distill the chloroplast from thespinachleaves by the differential centrifugation and pure them by the density gradient centrifugation. Examine the concentration and shape of these chloroplast from microscope.We saw round and ellipse chloroplast. Then treat the chloroplast with SDS, Dnase and proteinase. After that , we can extract the ctDNA (chloroplast DNA) with phenol/chloroform and chloroform/isoamyl alcohol. Examine this extractive with the 1% agrose electrophoresis and the quantity of the ctDNa with spectrophotometer, and the strip of it is quite regular and clear.
Key Words: chloroplast differential centrifugation density gradient centrifugation ctDNa

參考文獻(xiàn)
[1] 張知良，植物生物化學(xué)技術(shù)與方法，農(nóng)業(yè)出版社，1986
[2] 陳毓荃主編，生物化學(xué)試驗方法和技術(shù)，世界圖書出版公司，1999
[3] 翟中和主編，細(xì)胞生物學(xué)，高等教育出版社，2000
[4] 張七仙、劉俊起、李成霞等著。一種簡捷的同時提取植物總DNA和總RNA的方法，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗室，2001
[5] 李大力，一種從復(fù)含次生物質(zhì)的植物中提取DNA的方法，南京理工大學(xué)學(xué)報，2001，25（5）
[6] 曹凱鳴，核酸化學(xué)導(dǎo)論，復(fù)旦大學(xué)出版社，1991
[7] 劉祥等，分子細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗技術(shù)，首都師范大學(xué)出版社，2001
[8] 顧紅雅等著，植物基因與分子操作，北京大學(xué)出版社，1995
[9] 張自立、俞大新著，植物細(xì)胞和體細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)與原理，科學(xué)出版社1985
[10] 沈志偉、孫崇榮、朱儉，水稻葉綠體DNA的提取和純化，生物化學(xué)雜志，1989，5（1）
[11] B T Porse,Roger A Garrett. Ribosomal Mechanics,Antibodies and GTP Hydrolysis.Cell,1999(97)423-426
[12] Bottomley,W.,Spencer，D.and Whitfeld，P.R.,1974 Arch.Biochem.Biophys.，164：106－117
[13] Reeves，S.G..and Hall，D.O.，1980.Methods in Enzymology，Vol.69，pp.85-94
[14] 上海植物生理學(xué)會編， 植物生理學(xué)試驗手冊，上海科學(xué)技術(shù)出版社，1985
[15] 郭藹光，基礎(chǔ)生物化學(xué)，高等教育出版社 ，2001
[16] Sala，F(xiàn).，Amileni，A.R.，Parisi，B. and Spadari，S.，1980. Eur.J.Biochem.，112：211－217
[17] Walkar，D.A.，1980.Methods in Enzymology，Vol.69，pp.94-104
[18] 龔小松、閻隆飛，高等植物葉綠體DNA提純方法的改進(jìn)，科學(xué)通報，1990年，第6期