用于同線性測(cè)定與大尺度定位分子標(biāo)記的發(fā)展與優(yōu)化

1.7萬(wàn)字 42頁(yè) 原創(chuàng)作品，已通過(guò)查重系統(tǒng)


摘 要
擬南芥是十字花科植物是研究有花植物的遺傳、細(xì)胞、發(fā)育、分子生物學(xué)研究的模式植物。擬南芥很容易進(jìn)行人工誘變產(chǎn)生大量突變體所以我們利用擬南芥作為實(shí)驗(yàn)材料。而研究方法，我們采用圖位克隆的方法，從傳統(tǒng)的正向遺傳學(xué)入手進(jìn)行我們的研究。
圖位克隆首先進(jìn)行同線性測(cè)定與大尺度定位，然后利用3點(diǎn)測(cè)驗(yàn)進(jìn)行精細(xì)定位以克隆基因。果莢突變體來(lái)源于EMS誘變，圖位克隆是這類(lèi)突變體分析所必需的。我們實(shí)驗(yàn)的目的就是優(yōu)化用于同線性測(cè)定與大尺度定位的的分子標(biāo)記實(shí)驗(yàn)條件，建立擬南芥EMS突變體快速同線性測(cè)定試驗(yàn)平臺(tái)。
我們準(zhǔn)備Ler、Col、F1（Ler x Col) DNA樣品作為對(duì)照，樣品為EMS誘變Ler 生態(tài)型得到擬南芥突變體32與Col野生型雜交、自交得到F2提取相應(yīng)DNA。隨后對(duì)9個(gè)分子標(biāo)記探索他們最適PCR的條件，其中包括MgCl2的濃度以及退火溫度等。在PCR產(chǎn)物檢測(cè)我們比較PAGE凝膠和瓊脂糖膠的優(yōu)劣。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：（1）NGA1107、E5418、E10019 1.5 mM MgCl2退火溫度55℃；NGA6 1.5 mM MgCl2退火溫度50℃；CIW5 2.0 mM MgCl2退火溫度55℃；NGA8 2.0 mM MgCl2退火溫度55℃；CIW7 1.5 mM MgCl2退火溫度50℃；CIW9 2.0 mM MgCl2退火溫度55℃。（2）PAGE分辨率高、上樣少、花費(fèi)低，但操作困難。瓊脂糖分辨率稍低、上樣多、花費(fèi)高，但操作簡(jiǎn)單。權(quán)衡利弊，并參考實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)瓊脂糖凝膠效果好。隨后利用上述標(biāo)記對(duì)8999突變體進(jìn)行同線性測(cè)定，來(lái)檢驗(yàn)回收的結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)主要解決的問(wèn)題是用于同線性測(cè)定與大尺度定位分子標(biāo)記的發(fā)展與優(yōu)化。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)CIW7存在連鎖。但其他8種分子標(biāo)記不存在連鎖。因?yàn)閿M南芥5條染色體至少需要20個(gè)分子標(biāo)記，所以我們要用更多的分子標(biāo)記，更多的反應(yīng)條件，來(lái)精確實(shí)驗(yàn)。


關(guān)鍵詞：擬南芥；圖位克??；分子標(biāo)記