雜合肽囊素表達載體的構(gòu)建及表達

1.54萬字 33頁 原創(chuàng)作品，已通過查重系統(tǒng)

摘 要
囊素三肽是禽類、哺乳類動物的重要免疫活性因子，它能夠有效地提高動物的免疫力。因此，在禽類養(yǎng)殖業(yè)，囊素三肽被廣泛用于提高禽類、家畜的抗病能力，達到降低飼養(yǎng)成本的目的。但是，傳統(tǒng)的囊素生產(chǎn)方法主要通過活體提取、純化的方法制備而成的，其制備過程繁瑣、效率低、成本高，難以大量生產(chǎn)。
為了改進囊素的制備方法，本研究首先用雙酶切的方法酶切含有雜合肽囊素基因（N197）的克隆載體(pPUC57-N197)上，回收、純化線性化的雜合肽囊素基因（N197），并將其與pET32a質(zhì)粒表達載體連接后導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)。接著，利用SDS-PAGE方法分析了雜合肽囊素在大腸桿菌中的表達情況。接著，我們分析了不同轉(zhuǎn)速（160 rpm、190 rpm、220 rpm、250 rpm），不同溫度（27℃、32℃、37℃、42℃），不同菌種接種量（1%、2%、3%、4%），不同的IPTG濃度(0.5mM/L、1.0 mM/L、1.5 mM/L、2.0 mM/L)條件下，雜合肽囊素的表達量的高低。最后，實驗結(jié)果表明：雜合肽肽囊素基因能夠在大腸桿菌體內(nèi)大量表達，其最佳表達溫度為32℃，最佳誘導(dǎo)搖床轉(zhuǎn)速為190 rpm。

關(guān)鍵詞：囊素；誘導(dǎo)表達；表達條件優(yōu)化；